DNA粗提取与鉴定的详细实验过程

    张明霞2018/10/11 6:59:50阅读9次生物

    DNA粗提取与鉴定的详细实验过程是怎样的

  • 徐远振云南省 保山市2018/10/11 7:50:52

    1、实验原理:DNA与杂质的溶解度不同,在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,在0.14mol/l的NaCl溶液中溶解度最低。

    2、实验设计:

    ①实验材料的选取:凡是含有DNA的生物材料都可以考虑,但是使用DNA含量相对较高的生物组织,成功的可能性更大。

    ②破碎细胞:动物细胞的破碎比较容易,以鸡血细胞为例,在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可。

    ③去除滤液中的杂质:利用DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同,控制NaCl溶液的浓度去除杂质。

    ④DNA的析出:将处理后的溶液过滤,加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液,静置2~3min,溶液中会出现白色丝状物,这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸取上面的水分。

    ⑤DNA的鉴定:取两支20ml的试管,各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。然后,向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后,将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后,比较两支试管溶液颜色的变化,看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。

    0 0
  • 石忠民江苏省 盐城市2018/10/11 7:50:52

    DNA的鉴定
    ①配制二苯胺试剂取0.1 mL B液,滴入到10 mL A液中,混匀。
    ②鉴定 取4 mL DNA提取液放入试管中,加入4 mL 二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100 ℃)加热10 min 。在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。
    研磨液的配制方法
    Tris:10.1 g(相对分子质量为121.14),先加50 mL 蒸馏水溶解,用物质的量浓度为2moL/L的盐酸调至pH8.0,再加下述药品。
    NaCl:8.76 g(相对分子质量58.44)
    EDTA:37.2 g(相对分子质量372.24)
    SDS:20 g(相对分子质量288.3)
    待上述药品全部溶解后,再用蒸馏水定容至1 000 mL。
    若在室温低于20 ℃时配制药液,SDS呈沉淀析出,此时需要加温,才能将SDS溶解。如果提前配制的研磨液出现了沉淀,则应加温使沉淀溶解后再使用。
    研磨液中几种药品的作用
    SDS(十二烷基磺酸钠):可使蛋白质变性,与DNA分离。
    EDTA(乙二胺四乙酸二钠):为DNA酶的抑制剂,可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNA。
    物质的量浓度为0.15moL/L的氯化钠溶液:能很好地溶解DNA。
    Tris/HCl:提供缓冲体系,DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态。(Tris为三羟甲基氨基甲烷)
    鉴定DNA的其他方法 用紫外灯照射法鉴定DNA效果很好。具体鉴定方法如下。
    1.配制染色剂。用蒸馏水配制万分之五的溴化乙锭(EB)溶液。
    2.将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上,再滴1滴EB溶液染色。
    3.将蜡纸放在紫外灯(260 nm)下照射(暗室中),可见橙红色的萤光(DNA的紫外吸收高峰在280 nm处)。

    0 0
  • 田宝杰云南省 大理市2018/10/11 7:50:52

    DNA的粗提取
    ①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24 h。
    ②取材 称取30 g菜花,去梗取花,切碎。
    ③研磨 将碎菜花放入研钵中,倒入10 mL研磨液,充分研磨10 min 。
    ④过滤 在漏斗中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤入烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心,用1 000r/min的旋转频率,离心25 min,取上清液放入烧杯中)。在4 ℃冰箱中放置几分后,再取上清液。
    ⑤加冷酒精 将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并用玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。沉淀35 min后,可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。

    0 0
    你尚未登录高三网,不能进行回复

    请先登录注册